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安捷倫G1600AX 毛細管電泳儀
更新時間：2016-05-09
安捷倫G1600AX 毛細管電泳儀（capillary electrophoresis，CE）又稱高效毛細管電泳（high performance capillary electrophoresisHPCE） 是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的新型液相分離技術。毛細管電泳實際上包含電泳、色譜及其交叉內容，它使分析化學得以從微升水平進入納升水平，并可進行單細胞分析，乃單分子分析。
G1600A安捷倫G1600AX 毛細管電泳儀的詳細資料
安捷倫G1600AX 毛細管電泳儀
安捷倫G1600AX 毛細管電泳儀(CE) 為帶電物質，比如生物分子、小分子堿性或酸性藥物和離子提供快速分離、的效率和分離度，而這些分離使用 HPLC 常常難以實現。CE 還適用于樣品量非常有限的分離應用，所需要的緩沖液要比液相色譜或離子色譜少得多。使用單機模式，作為 CE/MS 的分離組件、或者作為液相色譜的輔助和正交分析技術。
安捷倫G1600AX毛細管電泳儀主要維修部件：
1.高壓電源
部件號：0950-2393
High Voltage Power Supply
Part Number: 0950-2393
The High Voltage Power Supply is a sealed module which contains the circuitry to
produce a maximum of ±30 kV. The supply is limited to 300 μA for safety.
2.空氣過濾器，貨號：3150-0619，孔徑：5微米
Part Number:3150-0619 Air Filter, 5 um
3.漏液傳感器 訂貨號：5061-3356 CE leak sensor assembly
4.空氣泵，訂貨號：G1600-67922 Airpump
5.毛細管卡套及毛細管卡盒標簽
G1600-60002 Capillary Cassette
G1600-94302 Cassette Label
卡套
內徑為 50 μm 的標準毛細管的準直接口（部件號 G1600-60210）
氘燈
訂貨號：2140-0585 D2 Lamp
加壓系統
進樣口壓力在–100 到+100 mbar的范圍可編程
可采用1 bar沖洗，也可用2–12 bar高壓沖洗
在毛細管入口和出口端可對樣品瓶加2–12 bar的高壓
進樣模式
自校正進樣系統，可在入口端或出口端進樣
編程范圍： 長達10000秒
壓力進樣： –100 到+100 mbar
電動進樣： –30 到+30 kV
自動進樣器/餾分收集器
50位樣品瓶盤
從毛細管入口和出口端對所有樣品瓶可以隨機進樣
物理參數
規格
寬度： 35 cm
高度： 59 cm
厚度： 51 cm
重量： 35 kg
電源要求
電源電壓： 100-240 V，
更高300 W
電源頻率： 50-60 Hz
接口
LAN、CAN、RS232、遠程控制、
模擬信號輸入(1V, 20 bit, 與A/D轉
換器集成)、模擬信號輸出
電泳功率
電壓范圍：
0 到± 30 kV 電源可設定
電流：0 - 300 μA可設定
功率：0 - 6 W可設定，恒電壓、
電流和功率操作
外部水浴控溫范圍為10–40 °C.
（不冷凝條件下，更低水浴溫度+1 °C）
補充緩沖液
為入口端和出口端樣品瓶重新注入新配制的緩沖液的衛星站，實現自動
連續操作?？蛇x擇緩沖液液面高度。
樣品瓶
100 μL （聚丙烯或玻璃），采用可重復密封的壓蓋瓶蓋
1 mL （聚丙烯），采用可重復密封的壓蓋瓶蓋
2 mL （玻璃），采用可重復密封的壓蓋瓶蓋
毛細管卡套
采用帕爾帖元件的高速強制空氣冷卻器
溫度范圍： 室溫以下10 °C，更高60 °C （卡套更低溫度10 °C）
更短的毛細管總長度：33 cm
毛細管外徑365 μm
檢測器
實時紫外二極管陣列檢測器(190–600 nm)
可控溫
波長分辨率：1 nm
響應時間： 0.025 到10 s
光源： 預定位氘燈或高亮度燈
信號： 采用安捷倫化學工作站同時記錄多達8個信號和采集全光譜圖
靈敏度： 1 μM 4-羥基-乙酰-苯酮，進樣條件50 mbar • 5 sec,
3 x 50 μm鼓泡毛細管，信噪比>6*
(20 mM 硼酸緩沖液，pH 9.3, 25 kV)
基線噪聲： <50 μAU （于響應時間2 秒）*
線性動態范圍： 1x104 (3 x 50 μm鼓泡毛細管)*
1 | G1600A CE1600毛細管電泳儀,帶自動進樣器樣品瓶，緩沖液瓶 CE1600 Capillary Electrophoresis Instrument. Installation Qualification kit, High Sensitivity Detection Cell kit and Services. |
2 | Chemsation 色譜工作站 ChemStation Edition Workstation. Software-only, withPC. |
3 | Diode Array Detector 二極管陣列檢測器 |
4 | M41 安裝費 Installation Charges |
儀器安裝
儀器尺寸以及重量
35kg重
注意事項
1. 所有儀器設備必須安放在平整堅固的表面，標準高度距地面約90CM，并保證沒有任何震動影響儀器的日常使用。
2. 請保證相鄰的儀器設備之間存在至少10CM（4英寸）的間距，并在后部留出足夠的空間（約15公分即6英寸）這樣可以保證儀器設備的基本散熱需要，并提供足夠的日常維修維護空間。
3. 請避免將儀器設備安裝在溫度，濕度變化比較明顯的位置，比如陽光直射區域，靠近敞開窗口的區域和空調出風口附近等
操作手冊
毛細管電泳標準操作規程
開機前準備：如進一個樣品，取樣品瓶七個，分別用記號筆標號，1.2.4.6.7.8.號，分別用移液槍加入
1號：buffer，加蓋
2號：buffer，加蓋
4號：緩沖溶液，加蓋
5號：緩沖溶液，加蓋
6號：緩沖溶液，加蓋
7號：樣品溶液，加蓋（加樣前過濾凈化）
8號：空，不加蓋（廢液瓶）
9號：空瓶，加蓋（氣沖洗）
（注意：各個樣品瓶加樣完成后超聲15分鐘以上，加蓋，瓶蓋蓋嚴平整,3號空位，49號空位，11-48號共可裝載38個樣品）
打開儀器電源
打開軟件，進入instrument,選擇inti進行初始化
方法編輯
進入method，選擇eidt entire method ，選擇前兩項后確認，填寫實驗名稱并確認，設置毛細管兩端與瓶底距離為4mm，設置柱溫盒溫度，選擇inlet（進口）為4號，outlet（出口）為5號，確認。Inlet換成7號（樣品），選擇加壓時間（即進樣時間），再將7號換成5or6號。
進入Preconditioning，選擇eidrt,設置1行，inlet為2號，outlet為8號，模式flush，2號，時間1min；2行flrsh，，inlet 換為1號，時間5min，3行wait，時間5min，4行flush，5號，時間20min（同次測定2，3行可省略）。
進樣模式，設置進樣壓力50mbar，時間4sec，確認。Swith設置為on，正負調節為postive，電壓值30kv，確認。設置檢測波長，帶寬，確認，收集為off。確認。保存方法。
樣品注冊，選擇小瓶圖標，選擇sample information ,選擇樣品瓶號，輸入樣品信息，確認，
關機
進入instrument,，選擇maintenance進行維護。
選擇inlet，設置為2號（即水瓶），再點擊藍色氣瓶圖標，flash（10-20min）。
選擇inlet，設置為號9號，（即氣沖洗瓶）再點擊藍色氣瓶
按方法里的位置置放對應的，1和2只能是Buffer,樣品放在10位以后的位置
檢測毛細管是否通暢：1號位加水，2號位加透明空瓶，flush 2分鐘，觀察2號出口是否有液滴
檢查水及BUFFER是否好
兩端加上水，flush查好基線
兩端加上BUFFER，FLUSH查看基線
并加方法中使用的電壓查看基線
對比基線，確認是哪里不好，純凈水or buffer or 氘燈能量不足還是檢測器其它地方？
常見故障排除
毛細管電泳常見故障排除 | ||
現象 | 可能的原因 | 解決方案 |
電流不穩定 | ||
波動或無電流
| 毛細管中形成氣泡 | 沖洗毛細管，程序升高電壓以限制初始加熱，和或對緩沖液脫氣 |
毛細管堵塞 | 用吸收溶液（如NaOH)沖洗毛細管。當觀察200nm的在線信號時.應該看到基線上有"臺階",如果仍然堵著,就用注射器或高壓氣體手工沖洗 | |
毛細管斷裂 | 更換毛細管 | |
緩沖液瓶中沒有緩沖液或者裝錯緩沖液 | 灌裝/改變緩沖液瓶 | |
大體積進樣 | 正常情況。分祈過程中電流應該穩定。 | |
基線不穩定 | ||
基線有毛剌
| 緩沖液沉淀 | 采用0.2或0.45µm的濾膜過濾緩沖液 |
緩沖液中有微小的氣泡 | 用超聲波或真空對緩沖液進行脫氣 | |
樣品沉淀 | 驗證樣品組分在緩沖液中有足夠的溶解度 | |
基線噪聲大
| 毛細管接口中的狹縫堵塞 | 用甲醇或水清洗狹縫。在放大鏡下觀察 |
氘燈老化 | 使用DAD測試來測定氘燈的光強度和工作時間。若必要就更換新的氘燈 | |
數據采集速率太高 | 確定峰寬，需要的話降低采集速率 | |
參比波長設置不合適 | 分析過程中采集1^光譜圖。在不影響樣品吸收的情況下 采用盡可能低的波長。并且采用寬的帶寬 | |
緩沖液在檢測波長有吸收 | 使用UV吸收更低的緩沖液,如磷酸鹽和硼酸鹽,特別是在低于210nm檢測時 | |
基線飄移
| 毛細管準直定位不合適 | 重新在檢測器塊中安裝毛細管卡套 |
溫度未平衡 | 打開頂蓋之后要有10-20分鐘的平衡時間 | |
氘燈剛剛開啟 | 開啟氘燈后要有15-30分鐘的平衡時間 | |
分離效率差 | ||
寬色譜峰
| 樣品超載 | 降低樣品濃度或進樣量 |
過量的焦耳熱 | 降低電壓、緩沖液電導或毛細管內徑 | |
變形的色譜峰
| 樣品和緩沖液的離子淌度不匹配 | 調節淌度或增大緩沖液和樣品的電導差異 |
樣品超載 | 降低樣品濃度或進樣量 | |
峰拖尾
| 樣品吸附到毛細管壁 | 使用葉I極值、高的緩沖液濃度、聚合物添加劑或涂層毛 細管 |
|
| |
現象 | 可能的原因 | 解決方案 |
遷移時間重現性差 | ||
樣品吸附到毛細管壁 | 緩沖液導致的EOF變化（特別是磷酸鹽和表面活性劑） 或樣品吸附 | 老化毛細管并要有足夠的平衡時間。更換毛細管 |
管壁電荷滯后 | 在高（或低)的PH條件下老化毛細管和使用低（或高)PH運行緩沖液引起 | 避免PH差異 要有足夠的平衡時間 |
緩沖液組分變化
| 電解導致的PH變化 | 更新緩沖液 |
緩沖液揮發 | 扣緊緩沖液瓶蓋和降低樣品盤溫度 | |
再生溶液廢液流進了出口緩沖液瓶 | 使用單獨的樣品瓶收集廢液 | |
再生溶液遺留在緩沖液瓶中 | 先將毛細管插入單獨的緩沖液瓶或水瓶中 | |
緩沖液瓶液面不* | 生成層流 | 使緩沖液瓶液面*。如果不更新緩沖液，就不要使用入 口瓶沖洗毛細管 |
不同批次毛細管的硅羥 基含量不同 | 內壁電荷差異和EOF波動 | 測定EOF并歸一化 |
溫度變化 | 粘度和EOF變化 | 使用可控溫的毛細管的系統 |
皡面積重現性差 | ||
突然施加高電壓 | 緩沖液受熱膨脹和樣品排出 | 程序升高分離電壓或在樣品之后注射緩沖液 |
樣品揮發 | 增加樣品濃度和峰面積 | 扣緊樣品瓶蓋和義或降低樣品盤溫度 |
儀器局限 | 系統增加了進樣時間的權重 | 增加進樣時間 |
峰面積重現性差 | ||
樣品記憶效應 | 外部進樣 | 使用進樣端平整光滑的毛細管。除去毛細管端口外面的聚 酰亞胺涂層 |
簡單地將毛細管伸進樣 品中引起的零進樣 | 外部進樣 | 不能*消除。增大進樣量以消除該效應 |
樣品吸附到毛細管壁 | 峰形變差(拖尾)未洗脫樣品 | 改變緩沖液的PH。增大緩沖液濃度 使用添加劑.比如纖維素或涂層毛細管 |
信噪比低 | 積分誤差 | 優化積分參數。增大樣品濃度。使用峰高 |
毛細管環境的溫度變化 | 粘度和進樣量的變化 | 使用可控溫的毛細管的系統 |
毛細管電泳實驗常見問題解答
毛細管電泳實驗常見問題解答 | |||||
目次 | 現象 | 檢查 | 檢查現象/結果 | 可能原因 | 解決方法 |
方案 | |||||
1 | 無樣品峰出現 | 檢查電流是否穩定 | 沒有電流 | 毛細管堵塞或斷裂 | 用水沖洗毛細管，并觀察是否有水流出，若無水流出請拆下卡盒檢查毛細管兩端和窗口是否斷裂；毛細管沒有斷裂的話可以用水反向高壓沖洗以試圖解決此問題。緩沖溶液需要過濾，將樣品過濾或者離心去除其中的顆粒。 |
電流波動很大，直至幾乎消失 | 緩沖溶液中有氣泡產生或者區帶中樣品析出 | 將緩沖溶液超聲脫氣，如果還有此現象發生，則可能是樣品區帶有析出，可以通過降低樣品濃度/延長ramp time來試圖解決這一問題；對于在緩沖溶液中溶解度不高的樣品則需要在緩沖溶液中加入添加劑以解決此問題。 | |||
電流初始值較小，后逐漸增大 | 樣品進樣量過大 | 減少進樣量，通常進樣參數設置在0.5psi,5sec左右 | |||
電流正常 | 樣品濃度過低 | 使用高濃度樣品測試，如果無法解決則有可能是以下其他原因 | |||
檢測波長設置不正確 | 請確認被分析物的特征吸收，檢查方法中的檢測波長設置 | ||||
分離極性錯誤 | 對于蛋白樣品，請注意蛋白在分離條件下其PI及所帶電荷；對于核酸樣品，通常條件下會帶負電荷 | ||||
樣品在毛細管內壁吸附 | 對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離，或采用pH條件或動態涂層防止樣品吸附。 | ||||
光學檢測器或光纖損壞 | 進行標準樣品的測試，如果沒有對應的結果出現，則有可能存在硬件問題，請工程師 | ||||
檢查毛細管窗口 | 是否有透明窗口 | 忘記開毛細管窗口或窗口位置不正 | 重新開毛細管檢測窗口，或將窗口調整到正確位置 | ||
2 | 樣品峰出現拖尾 |
|
| 樣品在毛細管內壁吸附 | 對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離，或采用pH條件或動態涂層防止樣品吸附。 |
3 | 樣品峰形不對稱 | 毛細管入口 |
| 毛細管入口切口不平齊 | 重新切割毛細管入口，注意毛細管切割方法，不可以用力過猛或反復刮擦 |
更改樣品溶劑 |
| 緩沖溶液與樣品溶液電解率差別過大 | 可采用緩沖溶液作為樣品溶劑 | ||
4 | 樣品峰過寬 | 降低樣品進樣量 | 有改善 | 樣品濃度太大 | 可降低樣品濃度或減少進樣量 |
無改善 | 樣品本身性質不均一 | 此原因主要是針對蛋白樣品，小分子樣品發生的概率較低 | |||
5 | 遷移時間不穩定 |
| 出峰時間不穩定且無規律 | 緩沖溶液與毛細管內壁平衡較慢 | 每次樣品運行之間避免用NaOH沖洗毛細管 |
出峰時間依次后延 | 樣品中有物質易發生吸附 | 首先在每次樣品運行之前用0.1N NaOH短時間沖洗毛細管，看遷移時間能否重復，如果效果不佳請使用涂層毛細管來改善結果或者將樣品再次處理，以去除樣品中易吸附的組分 | |||
6 | 峰形和出峰時間不穩定 | 更換緩沖溶液種類 | 峰形和時間穩定 | 緩沖溶液不穩定，易電解，或者是樣品在原緩沖溶液條件下不穩定 | 更換其它種類的緩沖溶液 |
峰形和出峰情況仍不穩定 | 樣品中物質易在毛細管內壁吸附 | 可采用涂層毛細管來克服此問題，或對樣品進行前處理 | |||
7 | 電流泄漏（Current Leakage） | 檢查毛細管是否在窗口處斷裂 | 毛細管斷裂 | 毛細管內緩沖溶液流出造成電流泄漏 | 更換新毛細管，并用水清洗光纖頭及檢測窗口 |
毛細管無斷裂 | 實驗環境濕度過大 | 使用抽濕機，并打開儀器Cartridge Cover；如果沒有抽濕機可以使用空調，在濕度過大的情況下可在儀器關閉時放置干燥劑，但是在儀器運行時一定要將干燥劑取出 | |||
8 | 無法加氣壓 | 檢查瓶塞是否蓋緊或更換瓶塞 | 更換后問題解決 | 瓶塞老化，失去彈性 | 請購買新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干 |
瓶頸處有液體，導致瓶塞易滑 | 向瓶中裝液體時不要過滿，也不要沾濕瓶頸 | ||||
若瓶塞無問題，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但壓力仍不可用 | 壓力系統問題 | 請工程師 | |||
9 | 遷移時間可重復但峰面積重復性不好 | 重新切割毛細管兩端 | 若問題解決 | 毛細管入口處不平 | 重新切割毛細管入口，注意毛細管切割方法，不可以用力過猛或反復刮擦 |
問題依然存在，嘗試電動進樣 | 若電動進樣可保持重現，則壓力控制或氣路存在問題 | 請工程師 | |||
10 | 毛細管或電極易折斷 | 檢查瓶蓋是否老化 |
| 瓶蓋老化 | 購買新的瓶蓋 |
電極是否不垂直 | 電極不垂直 | 將電極拉直 | |||
11 | 冷卻液泄漏 | 檢查卡盒內墊圈和卡子 |
| 漏裝或裝錯順序 | 嚴格按照操作手冊上的安裝順序安裝 |
儀器內部管路密封不嚴 | 請工程師 | ||||
12 | PDA光強低 | 檢測窗口Aperture型號 |
| 使用了窄細縫的Aperture | 請在使用DAD檢測器時務必使用標有8的Aperture |
13 | 譜圖基線不穩定 | 先用0.1N NaOH沖洗毛細管，然后不進樣運行原方法 | 基線改善 | 則為樣品中物質有吸附 | 重新預處理樣品或更改電泳條件 |
基線未改善 | 毛細管內有強烈吸附，或緩沖體系不穩定 | 更換新的毛細管，不進樣，只運行緩沖，觀察基線情況 | |||
更換新毛細管后基線仍然不穩，可采用Run Buffer A測試 | 基線改善 | 緩沖溶液與毛細管內壁平衡較慢 | 更換緩沖溶液種類，若基線變化對檢測無干擾，可保持原來電泳條件 | ||
基線無改善 | 檢測光源或其他光學器件不正常 | 請工程師 | |||
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